超微量分光光度計(jì)是核酸和(hé)蛋白(bái)定量的常用(yòng)工(gōng)具，在日常使用(yòng)過程中，空(kōng)白(bái)測量是在樣品測量前所必須的步驟。正确的理(lǐ)解什(shén)麽是NanoPhotometer®或任何其他(tā)超微量分光光度計(jì)上(shàng)的空(kōng)白(bái)測量，以及空(kōng)白(bái)讀數對(duì)工(gōng)作(zuò)流程和(hé)結果産生的影響，是保障儀器正确操作(zuò)和(hé)獲得可靠結果的基礎。

對(duì)于雙光束紫外(wài)-可見分光光度計(jì)而言，空(kōng)白(bái)與樣品測量在空(kōng)間上(shàng)分開(kāi)，扣除空(kōng)白(bái)後得到(dào)樣品的吸光值。而超微量分光光度計(jì)通常采用(yòng)單光束設計(jì)，空(kōng)白(bái)與樣品測量需要在時(shí)間上(shàng)分開(kāi)，在進行空(kōng)白(bái)測量後，得到(dào)表征光源強度的基線，然後樣品的測量值扣除空(kōng)白(bái)測量值得到(dào)樣品的吸光值。在實際測量過程中，在一次空(kōng)白(bái)測量之後，隻要樣品的溶劑成分不變，可以連續地測量多個樣品，結果的計(jì)算(suàn)都基于初始空(kōng)白(bái)值的扣除。然而，空(kōng)白(bái)基線的穩定是否受時(shí)間影響呢(ne)？即多久做一次空(kōng)白(bái)，可以确定樣品的吸光值和(hé)濃度準确可靠呢(ne)？

由于超微量分光光度計(jì)通常使用(yòng)氙閃燈光源，作(zuò)爲一種閃爍點亮(liàng)的冷光源，其穩定性是非常好(hǎo)的，基線的穩定性通常在1小(xiǎo)時(shí)内可保持在0.002-0.003A（10mm光程）之内的波動水(shuǐ)平，如果将光程因子計(jì)算(suàn)在内，相當于1-2ng/μl dsDNA的濃度水(shuǐ)平。對(duì)于常規濃度的樣品而言，這(zhè)個誤差的引入幾乎可以忽略，也(yě)不會(huì)反映在重複性之上(shàng)。因此，對(duì)于一般性實驗，在起碼一小(xiǎo)時(shí)内，空(kōng)白(bái)測量是不用(yòng)重新進行的（在樣品台清潔的情況下(xià)）。而對(duì)于低(dī)濃度樣品和(hé)一些(xiē)流程嚴格控制的實驗而言，基線随時(shí)間的波動将引入值得關注的測量不确定度，可能(néng)産生可觀的示值誤差，但(dàn)對(duì)重複性的影響較小(xiǎo)。因此，對(duì)于一些(xiē)特殊樣品，空(kōng)白(bái)測量與樣品測量不宜間隔較長的時(shí)間，以減小(xiǎo)風(fēng)險，甚至可能(néng)每個樣品都重新做空(kōng)白(bái)。

NanoPhotometer®在每次開(kāi)機時(shí)都會(huì)對(duì)光源強度進行檢測，初始化通過即代表光源已進入工(gōng)作(zuò)狀态。在使用(yòng)過程中，也(yě)可以通過光譜診斷功能(néng)，實時(shí)地進行光源性能(néng)檢查。空(kōng)白(bái)測量和(hé)基線穩定性對(duì)于超微量而言是重要的，不少日常使用(yòng)中出現(xiàn)的問題都源自(zì)于空(kōng)白(bái)和(hé)基線漂移。除了(le)設備自(zì)身的診斷功能(néng)之外(wài)，定期的進行設備的基線穩定性檢查也(yě)有助于判斷和(hé)基線有關的部件是否正常，如光源、光學路徑和(hé)檢測器。

Implen通過樣品壓縮法實現(xiàn)了(le)測量時(shí)間的大(dà)幅縮短，使光源的壽命延長至10年以上(shàng)，在這(zhè)個基礎上(shàng)，進一步增強了(le)光線的強度控制和(hé)穩定性。而出色的光學路徑設計(jì)和(hé)高(gāo)性能(néng)通光材料的使用(yòng)，也(yě)确定了(le)基線波動在很(hěn)小(xiǎo)的範圍内。在實際使用(yòng)過程中，用(yòng)戶根據樣品的實際情況和(hé)實驗允差要求，制定合理(lǐ)的空(kōng)白(bái)測量頻率，可在确定可靠性的同時(shí)提高(gāo)實驗效率。