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    前分光?後分光?你(nǐ)了(le)解你(nǐ)的超微量嗎?

     紫外(wài)-可見(UV-Vis)分光光度計(jì)通過測量紫外(wài)和(hé)可見光波段的光吸收對(duì)樣品進行定量和(hé)鑒定。分光光度計(jì)的曆史前身可以追溯到(dào)1814年,當時(shí)約瑟夫·馮·弗勞恩霍夫(Joseph von Fraunhofer)(弗勞恩霍夫應用(yòng)研究促進協會(huì)的贊助人)利用(yòng)自(zì)己發明(míng)的分光光度計(jì)測量太陽光并發現(xiàn)太陽光譜中的574條暗譜線(弗勞恩霍夫線)。

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    而一台商用(yòng)紫外(wài)-可見分光光度計(jì)是阿諾德·貝克曼在1941年推出的,該儀器利用(yòng)石英棱鏡将鎢燈發出的光分離爲吸收光譜,并利用(yòng)光電管(光電二極管的前身)記錄信号。爲了(le)說明(míng)光源和(hé)電子設備的背景影響,紫外(wài)-可見分光光度計(jì)測量通過樣品的光的強度,并自(zì)動減去背景,以提供代表樣品測定特性的精确讀數。

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    分光光度計(jì)發展到(dào)今天,已成爲生命科學、醫(yī)藥科學、分析化學等領域重要的儀器。而超微量分光光度計(jì)的出現(xiàn),讓分析所需的樣品量降低(dī)至微升級别,特别适合于生命科學珍貴樣品的的定量分析。Implen于2005年推出的Label Guard超微量比色皿,使任何用(yòng)戶都可以在常規紫外(wài)分光光度計(jì)上(shàng)進行微量樣品測量,而2006上(shàng)市的Nanophotometer®系列超微量分光光度計(jì),标志了(le)“後分光“時(shí)代的開(kāi)始。

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    微量紫外(wài)-可見分光光度計(jì)與常規的分光光度計(jì)相比,有着不同的設備結構,其特性是能(néng)夠于獲得全光譜分析結果,使得核酸、蛋白(bái)質等樣品可被定量及分析。常規分光光度計(jì)常采用(yòng)前置分光器(如光栅),使光源發出的複色光分光爲單色光,這(zhè)能(néng)夠讓入射光保持很(hěn)好(hǎo)的單色性,單色光穿過樣品池産生吸收,由二極管或倍增管檢測器檢測光強度。當光栅進行轉動時(shí),就會(huì)有不同波長的單色光逐一通過樣品池,這(zhè)時(shí)就可進行光譜掃描測量。

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    雖然在靈敏度、噪音(yīn)、雜(zá)散光等方面具備優勢,但(dàn)光譜掃描所需的時(shí)間往往是較長的,這(zhè)并不太适合于生命科學樣品的定量及光譜分析。因此,目前市面上(shàng)大(dà)多數的用(yòng)于測量生命科學樣品的微量分光光度計(jì)采用(yòng)的是相反的光學結構,即“後分光”形式。

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    由氙燈光源發出的複色光,通過樣品(微量或比色皿樣品),在相應的波長下(xià)分别産生吸收,減弱的複色出射光通過分光器進行分光,後由陣列式檢測器同時(shí)檢測所有波長對(duì)應的吸光值。陣列式檢測器通常爲CCD,爲長條形結構,每個像元組能(néng)夠精确的檢測對(duì)應的波長。因此,嚴謹的說,微量分光光度計(jì)的全光譜測量,是無需“掃描“的”,而是同時(shí)獲得的。

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    因此,微量分光光度計(jì)的核心部件中,氙燈替代了(le)鎢燈氘燈組,後分光結構替代了(le)前分光結構,陣列式CCD檢測器替代了(le)光電二極管檢測器。在同時(shí),也(yě)完全能(néng)夠滿足樣品測量準确性的要求,可謂是爲大(dà)分子定量分析量身定制的儀器。而Nanophotometer®出衆的全光譜測量性能(néng),也(yě)廣泛應用(yòng)于分析化學領域。

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    後分光的結構還有其優勢,由于分光器是固定的,無需轉動進行光譜掃描,因此波長的穩定性是非常好(hǎo)的。而掃描式分光光度計(jì)必須考慮分光器轉動導緻的波長漂移問題,需要定期檢測或調整。在後面幾期我們将介紹儀器的檢定問題,會(huì)具體介紹。

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    無論是前分光,還是後分光,都各具特點,也(yě)适合于不同的應用(yòng)需求。充分的了(le)解構造和(hé)原理(lǐ),有助于您合理(lǐ)的選擇和(hé)正确的使用(yòng)儀器。德國Implen 18年來(lái)一直專注于微量樣品吸光度測量領域,我們以豐富的制造和(hé)應用(yòng)經驗爲用(yòng)戶提供有效的産品,也(yě)熱衷于分享知(zhī)識與傳遞價值。Implen是值得您信賴的超微量品牌。



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