視(shì)網膜

視(shì)網膜是眼球中重要的結構之一，它是位于眼球壁内層的一層透明(míng)薄膜，周圍布滿了(le)大(dà)量的感光細胞和(hé)神經纖維，通過它可以直接接受來(lái)自(zì)外(wài)界環境的光線并在眼球内形成影像，通過神經纖維将影像信息傳送至大(dà)腦(nǎo)中樞形成視(shì)覺。

其它中樞神經系統内也(yě)有小(xiǎo)膠質細胞，在健康的視(shì)網膜中，神經元和(hé)小(xiǎo)膠質細胞之間的交流對(duì)維持神經元向大(dà)腦(nǎo)發送信号的能(néng)力非常重要。

視(shì)網膜血管作(zuò)爲人體内可以進行非創傷直接觀察的深層微血管，其生理(lǐ)狀況的檢查對(duì)高(gāo)血壓、糖尿病、動脈硬化等心血管疾病的診斷、治療評價具有重要意義。

一般而言，眼底圖像通常都是通過激光掃描成像進行采集，但(dàn)是由于眼底可觀測的視(shì)野往往是很(hěn)有限的，一個患者的眼底信息需要多張掃描圖像才能(néng)完全顯示出來(lái)。這(zhè)種局限性大(dà)大(dà)不利于病情進行全面的、細緻的診斷。Tissue Cytometry全景組織流式定量分析技術進行全景圖像獲取，在單細胞、組織結構、細胞空(kōng)間信息等多個層面進行定位、定性、定量分析。從(cóng)而更好(hǎo)的對(duì)病變區(qū)域進行有針對(duì)性的跟蹤觀察和(hé)全面分析。

實驗目的

視(shì)網膜熒光樣本中小(xiǎo)膠質細胞胞體、神經纖維識别、血管識别、血管斑點識别、神經元與血管的距離分析。

實驗流程

1. 利用(yòng)TissueFAXS系統進行玻片熒光的全景掃描。

2. 使用(yòng)StrataQuest分析軟件進行定量分析。

3. 根據FITC通道(dào)識别神經胞體并篩選出細胞胞體（細胞核識别算(suàn)法）。

4. 膜識别FITC染色信号的區(qū)域确定神經纖維，并對(duì)不同長度神經纖維進行分類。

5. 識别血管的Texa Red染色區(qū)域面積及強度。

6. 計(jì)算(suàn)神經元與血管間的空(kōng)間距離，并統計(jì)數量和(hé)占比。

7. 根據毛細血管亮(liàng)斑的識别結果，統計(jì)新生小(xiǎo)血管數量。

實驗過程

單通道(dào)灰階圖（↑：FITC，↓：Texa Red）

根據染色強度，染色面積，細胞形态學，利用(yòng)正反向回溯功能(néng)和(hé)設門(mén)圈選Gating，排除雜(zá)質，細胞碎片，黏連細胞（綠色框線标記），獲得神經元胞體，（粉色框線标記），并将胞體按照面積分爲兩類（散點圖）。

由于該視(shì)網膜樣本是标記的小(xiǎo)膠質細胞，根據面積将神經胞體分爲兩類（Small bodycell，Big bodycell），反向回溯Big bodycell中的細胞後，應用(yòng)Input Gate功能(néng)篩選短粗的神經纖維，作(zuò)爲激活态的小(xiǎo)膠質細胞。

激活态小(xiǎo)膠質細胞識别

血管識别：根據Texa Red通道(dào)進行識别，并去除面積小(xiǎo)的及非同一焦面的血管，僅對(duì)确定的清晰的同一焦面的大(dà)血管進行面積統計(jì)。

血管與小(xiǎo)膠質細胞的距離

血管與小(xiǎo)膠質細胞的距離0-0.1μm（紅(hóng)色框線标記）

血管與小(xiǎo)膠質細胞的距離0.1-1μm（粉色标記）

血管與小(xiǎo)膠質細胞的距離1-3μm（粉色标記）

此外(wài)，Tissue Cytometry散點圖-熱力圖-數據同屏疊加對(duì)比功能(néng)，可以整合多種數據分析的二維圖像，便于研究者們直觀的對(duì)比與校驗；同屏對(duì)比功能(néng)，不但(dàn)可以同屏預覽，還可以支持多點實時(shí)聯動縮放(fàng)，便于觀察/分析圖像，打通信息分析時(shí)數據-圖像之間的屏障。